[導(dǎo)讀] ELISA實(shí)驗(yàn)成功的原因有哪些？您的實(shí)驗(yàn)思路是怎樣的？ELISA試劑盒作為上海滬鼎生物公司主營且熱銷的產(chǎn)品之一，ELISA實(shí)驗(yàn)技術(shù)問題必然是售后服務(wù)中的一大焦點(diǎn)。日前上午9時(shí)，我公司展開2015酶聯(lián)免疫技術(shù)交流會(huì)，會(huì)議主題也正是我公司今日資訊主題：ELISA實(shí)驗(yàn)成功的原因重在“點(diǎn)子"上。

    會(huì)中，我公司技術(shù)總監(jiān)表示：從標(biāo)本的采集到實(shí)驗(yàn)操作步驟完畢，每一個(gè)流程都是影響實(shí)驗(yàn)的因素。當(dāng)然，這是在試劑盒質(zhì)量保證且正確保存的條件下。為什么說ELISA實(shí)驗(yàn)成功的原因重在“點(diǎn)子"上？只要每一步流程都能夠達(dá)到正確的“點(diǎn)"上，那么您定能夠做出的實(shí)驗(yàn)。

一、檢測標(biāo)本的收集　　

    ①收集血液的試管應(yīng)為一次性的無熱原，無內(nèi)毒素試管。　　

    ②血漿抗凝劑推薦使用EDTA。避免使用溶血，高血脂標(biāo)本。　　

    ③標(biāo)本應(yīng)清澈透明，懸浮物應(yīng)離心去除。　　

    ④標(biāo)本收集后若不及時(shí)檢測，請(qǐng)按一次使用量分裝，凍存于-20℃，-70℃電冰箱內(nèi)，避免反復(fù)凍融，3-6月內(nèi)檢測。

    在收集樣本前都必須有一個(gè)完整的計(jì)劃，必須清楚要檢測的成份是否足夠穩(wěn)定。對(duì)收集后當(dāng)天就進(jìn)行檢測的樣本，及時(shí)儲(chǔ)存在4℃?zhèn)溆?。?duì)于隔天再檢測的樣本，及時(shí)分裝后凍存在-20℃?zhèn)溆?，有條件的，-70℃凍存?zhèn)溆?。?biāo)本應(yīng)避免反復(fù)凍融。

二、不斷學(xué)習(xí)ELISA操作技巧

    1.操作前應(yīng)對(duì)實(shí)驗(yàn)的物理參數(shù)有充分的了解，如環(huán)境溫度（保持在18 C～25℃）、反應(yīng)孵育溫度和孵育時(shí)間、洗滌的次數(shù)等，要先查看水育箱溫度，ELISA試劑盒是否符合要求。

    2.正確使用加樣器加樣器應(yīng)垂直加入標(biāo)本或試劑，避免刮擦包被板底部。加樣過程中避免液體外濺，血清殘留在反應(yīng)孔壁上，加樣器吸頭要清洗干凈，避免污染，加樣次序要與說明書一致，否則可導(dǎo)致結(jié)果錯(cuò)誤，實(shí)驗(yàn)重復(fù)性差。

    3.手工洗板加洗液時(shí)沖擊力不要太大，洗滌次數(shù)不要超過說明書推薦的洗滌次數(shù)，洗液在反應(yīng)孑L內(nèi)滯留的時(shí)間不宜太長。不要使洗液在孑L間竄流，造成孔問污染，導(dǎo)致假陰性或假陽性。

    4.要保證加液量一致 我們?cè)谑褂脮r(shí)感覺滴瓶加液不如加樣器好，滴瓶不易控制加液量不準(zhǔn)，造成顯色不統(tǒng)一，判斷錯(cuò)誤。

    5.顯色液量不可過多 加樣的工作環(huán)境不能處于陽光直射的環(huán)境下，加顯色系統(tǒng)后要避光反應(yīng)，顯色液量不能過多，以免顯色過強(qiáng)。

三、操作示意圖

操作指南：固相包被→加待測樣品→溫育→洗滌+加酶標(biāo)物→溫育→洗滌→加底物→溫育一加終止液→比色→判定結(jié)果

四、OD值的范圍

    在ELISAzui后步驟中OD值的范圍也是有一定講究的，不容小覷。說到OD值范圍，我公司業(yè)務(wù)員在售后問題的處理過程中也常會(huì)有客戶咨詢其范圍是多少。其實(shí)是不一定的，我們以AβELISA為例，2以上就會(huì)偏飽和，變化不容易做出來，所以一般把model組控制在0.8-1.5，而control組的話基本跟空白差不多，不到0.1。

    所以，一般情況下我們會(huì)建議先做個(gè)標(biāo)曲以及樣品的梯度稀釋，然后選擇在標(biāo)曲中間位置的樣品稀釋度作為以后的參照稀釋度。

    同時(shí)，也與使用的detector有關(guān)，detector有自己的檢測范圍和線性范圍。如果實(shí)驗(yàn)室使用的儀器，說明書上說檢測范圍是0~4，線性范圍是0~3，但我們自己的實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示的線性范圍是0~2OD。如果只檢測空白的沒有經(jīng)過處理的Elisa孔，大致在0左右。

上海滬鼎生物公司ELISA試劑盒提供專業(yè)的全程技術(shù)指導(dǎo)服務(wù)及免費(fèi)代檢測服務(wù)，助您的實(shí)驗(yàn)一臂之力！新品試劑盒將在4月1日正式推出。 我公司試劑盒產(chǎn)品操作方便，實(shí)驗(yàn)可靠。歡迎您致電我司業(yè)務(wù)員……

上海滬鼎生物科技有限公司

2015年03月30日