宋海燕，劉 波，張駿飛，董 靜，郭 遠(yuǎn)，劉利偉，陳從新

【摘要】 目的 探討細(xì)胞因子誘導(dǎo)的殺傷細(xì)胞（CIK）輸注聯(lián)合經(jīng)動(dòng)脈插管化療栓塞術(shù)（TACE）治療原發(fā)性肝癌患者延緩門靜脈癌栓形成的可能性。方法 選擇 2010 年 1 月～2014 年 12 月我院收治的原發(fā)性肝癌患者 44 例，22 例接受 TACE 聯(lián)合CIK 細(xì)胞輸注治療，另 22 例只接受 TACE 治療。采用Ficoll 兩步分離法分離外周血單個(gè)核細(xì)胞，經(jīng) IFN-γ、抗 CD3 單克隆抗體和 IL-2 誘導(dǎo)，使用流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞 CD 抗原表達(dá)鑒定 CIK 細(xì)胞培養(yǎng)成功， 常規(guī)行 TACE 治療，在 TACE 治療半月后輸注 CIK 細(xì)胞懸液 3 次，細(xì)胞總數(shù)為 1.0×109。治療前后行腹部 CT 檢查， 確定門靜脈栓子形成情況。結(jié)果 治療后 1 m、3 m 和 6 m，聯(lián)合組患者門靜脈癌栓發(fā)生率分別為 4.5%、13.6%和27.2%，而 TACE 組則分別為 9.0%、45.5%和 63.6%（P<0.05）；在治療 3 月時(shí)，聯(lián)合組腫瘤大小為（4.77±1.27）cm，顯著低于 TACE 組（[  5.54±1.14）cm,P＜0.05]；在治療 3 月時(shí)，聯(lián)合組血清甲胎蛋白水平為(83.14±31.91)  ng/ml，也顯著低于 TACE 組[(139.24±98.76)  ng/ml，P＜0.05]；兩組肺部、顱腦和骨骼等遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移發(fā)生率無(wú)顯著性差異（P>0.05）。結(jié)論 CIK 細(xì)胞輸注聯(lián)合 TACE 可明顯減緩原發(fā)性肝癌患者門靜脈栓子形成的時(shí)間，改善肝功能，同時(shí)能有效控制腫瘤的生長(zhǎng)及擴(kuò)散。

【關(guān)鍵詞】 原發(fā)性肝癌；門靜脈癌栓；細(xì)胞因子誘導(dǎo)的殺傷細(xì)胞；過(guò)繼免疫療法；經(jīng)動(dòng)脈插管化療栓塞術(shù)

    原發(fā)性肝癌是常見的消化道惡性腫瘤。研究顯 示，原發(fā)性肝癌的發(fā)生率有明顯上升的趨勢(shì)[1]。肝癌

作者單位：230031  合肥市 第 105 醫(yī)院感染病科

作者：宋海燕，女，33 歲，主治醫(yī)師。從事肝病臨床工作

患者早期無(wú)特異性臨床表現(xiàn)，發(fā)現(xiàn)時(shí)多已發(fā)生腫瘤轉(zhuǎn)移。由于肝臟血供豐富，且為雙重血液供應(yīng)，肝癌一般首先發(fā)生肝內(nèi)轉(zhuǎn)移，而門靜脈栓子形成就是一種常見的類型。因癌栓形成后明顯增加了上消化道出血的風(fēng)險(xiǎn)，給進(jìn)一步治療帶來(lái)難度。因此，預(yù)防癌栓形成尤為重要。對(duì)于伴有門靜脈栓子形成的肝癌患者，能耐受手術(shù)者應(yīng)手術(shù)剝除治療，并可在此基礎(chǔ)上經(jīng)肝動(dòng)脈或門靜脈置管灌注化療，這是目前比較理想的治療方法。還有其它一些微創(chuàng)治療方案，如超聲微波消融、放療及門靜脈內(nèi)置支架等。這些治療方法的共同缺點(diǎn)是無(wú)法防止腫瘤復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移。近年來(lái)，有學(xué)者采用細(xì)胞因子誘導(dǎo)的殺傷細(xì)胞（Cytokine-induced  killer  cells，CIK）輸注，作為一種全身治療方法，可能會(huì)達(dá)到防止肝癌轉(zhuǎn)移或控制遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移灶發(fā)展的效果[2～4]。本研究采用 CIK 輸注聯(lián)合經(jīng)動(dòng)脈插管化療栓塞術(shù) (Transcatheter arterial chemoembolization, TACE) 治療原發(fā)性肝癌患者，觀察治療后門靜脈癌栓形成及肝內(nèi)腫塊大小變化情況，發(fā)現(xiàn)該聯(lián)合治療能有效控制腫瘤生長(zhǎng)，并明顯降低門靜脈癌栓的發(fā)生率。

    1資料與方法

1.1 一般資料 自 2010 年 1 月～2014 年 12 月我院收治的原發(fā)性肝癌患者 44 例，男性 41 例，女性 3 例；年齡 33～68 歲，平均年齡（42.6±8.3）歲。所有患者診斷符合《原發(fā)性肝癌診療規(guī)范（2011 年版）摘要》[5] 標(biāo)準(zhǔn)，不伴有門靜脈栓子，同時(shí)無(wú) TACE 治療禁忌證者入選。在入選患者中，接受單一 TACE 治療者 22 例，另 22 例在 TACE 治療的基礎(chǔ)上給予靜脈輸注 CIK 細(xì)胞懸液治療。治療前，兩組患者各項(xiàng)指標(biāo)比較均無(wú)顯著性差異。伴有門靜脈栓子或其他部位轉(zhuǎn)移者或有 TACE 治療禁忌證者被除外。

1.2CIK 細(xì)胞的分離、純化和培養(yǎng)  采用 Ficoll 兩步分離法分離出外周血單個(gè)核細(xì)胞，用含血清培養(yǎng)基調(diào)整細(xì)胞數(shù)為 1～5×106／ml，在 37℃，5%CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，于培養(yǎng)的第 1  d 加入終濃度為 1000U/ml 的 IFN-γ(上海滬鼎生物科技有限公司)；第 2d 加入終濃度為 100  ng/ml 抗 CD3 單克隆抗體［妙通（上海）生物科技有限公司］、1000  U/  ml 的 IL-2（上海常斤生物科技有限公司），而后每隔 1～2  d加入新鮮的含 1000 U/ml 的 IL-2 *培養(yǎng)液，并調(diào)細(xì)胞數(shù)為 1～5×106/ml，繼續(xù)培養(yǎng)、傳代，定期補(bǔ)充抗 CD3 和IL-2。使用流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞 CD 抗原的表達(dá)情況。同時(shí)取培養(yǎng)上清行乙型肝炎病毒、丙型肝炎病毒、HIV 和梅毒感染標(biāo)志物檢測(cè)，行細(xì)菌培養(yǎng)、真菌培養(yǎng)，檢測(cè)抗支原體 -IgG 和內(nèi)毒素水平。

1.3治療方法 所有患者每月行常規(guī) TACE 治療 1 次，治療組 22 例患者在此基礎(chǔ)上接受 CIK 細(xì)胞治療，即在 TACE 治療半月后輸注 CIK 細(xì)胞懸液，連續(xù)或隔日輸注 1 次，共 3 次，細(xì)胞總數(shù)為 1.0×109。

1.4檢測(cè)與檢查 常規(guī)檢測(cè)血清甲胎蛋白（Alpha fetal protein, AFP）、血清總膽紅素 (Total serum bilirubin, TBIL)、血清白蛋白(Serum albumin, Alb)和凝 血 酶 原 時(shí) 間 標(biāo) 準(zhǔn) 化 比 值（International normalized ratio, INR）等。連續(xù)觀察 6 個(gè)月。每次治療前所有患者均行肝臟增強(qiáng) CT 掃描，評(píng)估腫瘤大小及轉(zhuǎn)移情況，并了解有無(wú)門靜脈癌栓形成。

1.5統(tǒng)計(jì)方法 應(yīng)用 SPSS 17.0 軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理，組間發(fā)生率的差異比較采用 x2 檢驗(yàn)，兩組間生化指標(biāo)和腫瘤大小的計(jì)量資料以（x依s）表示，采用不 成對(duì)樣本的 t 檢驗(yàn)。P<0.05 表示差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2結(jié)果

2.1門靜脈癌栓形成情況 在治療結(jié)束后 6 個(gè)月， 兩組患者門靜脈栓子形成情況見表 1 和圖 1。

  表 1   兩組門靜脈癌栓發(fā)生情況（%）的比較

  例數(shù) 1 m 3 m 6 m CIK 22 1（4.5） 3（13.6） 6（27.2）①

  TACE 22 2（9.0） 10（45.5） 14（63.6）淤P<0.05

 2.2療效情況 在治療后，兩組患者血清 AFP 均有不同程度的降低；在治療 3 月時(shí)，兩組間 AFP 水平差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）；在 TACE 治療后對(duì)照組腫瘤生長(zhǎng)速度得到有效的控制，短時(shí)間內(nèi)未明顯增大，治療組幾乎所有患者腫瘤都停止增大，治療 3 月時(shí)兩組間腫瘤直徑大小差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義

（P<0.05，表 2）。表 2 兩組血清 AFP 和腫塊大?。▁依s）的比較

例數(shù) AFP（ng/ml） 腫塊大小 (cm)

CIK 治療前         22 142.09依103.15 5.97依1.33 治療后 3 m 22 83.14依31.91淤 4.77依1.27 治療后 6 m 22 85.53依33.12于 4.12依1.65盂

TACE 治療前 22 156.23依109.58 6.37依1.37

治療 3 m 22 139.24依98.76 5.54依1.14

  治療后 6 m 21 140.03依101.13 4.95依1.34

與 TACE 組比，淤t=1.759,P=0.038；于t=1.873,P=0.027；盂t= 1.826,P=0.040

2.3肝功能的變化情況 在治療的早期，兩組肝功能指標(biāo)均有輕度改善。自治療 3 月后直至隨訪結(jié)束，兩組間血清TBIL 水平差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）；血清 Alb 和 INR 指標(biāo)在兩組間比較，差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05，表 3）。

  表 3  兩組血清肝功能指標(biāo)（x依s）的比較 Alb（g/L） TBIL（滋mol/L） INR

治療前 治療 3 月 治療前 治療 3 月 治療前 治療 3 月治療組 37.6依5.4 35.9依10.240.6依12.9 29.5依9.9 1.23依0.08 1.24依0.06 對(duì)照組 36.9依7.8 35.4依7.5 62.7依20.850.4依22.7 1.23依0.09 1.23依0.07

t 6.216 6.164 5.896 15.265 1.431 1.386

P >0.05 >0.05 >0.05 <0.05 >0.05 > 0.05

2.4遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移情況 兩組患者遠(yuǎn)處腫瘤轉(zhuǎn)移主要發(fā)生在肺、膽管系統(tǒng)、胸壁、腦和腰椎，但兩組轉(zhuǎn)移發(fā)生率無(wú)顯著性差異（P>0.05，表 4）。

表 4 兩組遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移發(fā)生情況（%）的比較

例數(shù) 1 m 3 m 4  m 5  m 6 m 治療組 22 0（0.0） 0（0.0）   1（4.5）  1（4.5）  2（9.0） 對(duì)照組 22 0（0.0） 1（4.5） 1（4.5） 2（9.0） 3（13.6）

3討論

CIK 細(xì)胞是新近發(fā)展起來(lái)的過(guò)繼免疫細(xì)胞。由于CIK 細(xì)胞具有增殖速度快，抗腫瘤能力強(qiáng)，而且在細(xì)胞的數(shù)量上能滿足臨床的需要等特點(diǎn)，因而臨床應(yīng)用前景較好。目前，CIK 細(xì)胞輸注已廣泛應(yīng)用于臨床疾病的治療[6～10]，如肝癌、結(jié)腸癌、腎癌等。大量的臨床研究資料顯示[8]，CIK 細(xì)胞輸注治療可以提高患者的免疫功能及生存質(zhì)量，有助于提高療效，延長(zhǎng)患者的生存期。目前，使用的 CIK 細(xì)胞來(lái)源有自身外周血、同種異體外周血或臍帶血等。

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