看似簡單的Elisa試劑盒操作實驗中，有著一些關(guān)鍵重點需要大家了解及掌握。在今天的技術(shù)分享中，上海滬鼎生物公司Elisa顧問為您講解實驗重點：

一、檢測試劑要適量

　　切勿使用過多的檢測試劑。如果濃度過高，或者未正確稀釋，則會導致高背景。也不要顯色過度，如有必要，優(yōu)化一下何時應(yīng)加入終止液。如果您的ELISA試劑盒不幸地遇到了高背景，那么也無需太擔心，依次查看ELISA系統(tǒng)中的組分，并排除可能存在的問題。悉心優(yōu)化，相信很快就會有漂亮的結(jié)果。

二、洗滌很重要

　　如果未結(jié)合的材料殘留在微孔板中，那么它會增加背景噪音。有必要的話，可增加洗滌液中的鹽濃度，這會阻止非特異結(jié)合反應(yīng)。如果背景過高，而您懷疑洗滌不夠時，可以嘗試增加洗滌次數(shù)。

三、關(guān)鍵的封閉

　　封閉液的作用是讓不相關(guān)的蛋白占據(jù)微孔板中潛在的結(jié)合位點。這就降低了可產(chǎn)生信號的抗體非特異結(jié)合的機會。您當然也希望抗體只與目的蛋白結(jié)合吧。如果您的背景過高，懷疑封閉不充分，那么您可以嘗試使用更高濃度的封閉液，或適當延長封閉時間。

　　如果您一直被背景問題所困擾，那么也許您該花些時間來優(yōu)化封閉液。這可能需要時間，但也是值得的。目前主要有兩種類型的封閉液：蛋白和非離子型去污劑。您使用的類型須取決于多個因素，包括微孔板的表面試劑、吸附的抗原、您的抗體和檢測試劑。好的封閉液應(yīng)降低非特異性結(jié)合，但它不應(yīng)當與抗原、抗體或檢測試劑發(fā)生相互作用。

　　zui常用的非離子型去污劑是Tween-20(上海滬鼎生物公司的Tween-20 吐溫-20 新貨已經(jīng)上市啦，需要的哦！)。這種封閉液便宜、穩(wěn)定，在去除洗滌過程中的一些非特異結(jié)合上很有用。但它們只在存在時起作用，因為很容易被洗掉。因此所有洗滌液中也必須添加封閉液。請勿使用高濃度，它會降低特異結(jié)合，產(chǎn)生假陰性。另一個選擇是使用蛋白和非離子型去污劑這兩種封閉液，后者可協(xié)助洗滌過程中的封閉。

　　蛋白封閉液則有所不同，是*的。它們與開放位點結(jié)合并封閉，同時穩(wěn)定與微孔板結(jié)合的抗原分子。常用的蛋白封閉液包括牛血清白蛋白(BSA)、脫脂奶粉、正常血清和魚明膠。血清組分的內(nèi)在多樣性可使它有效攔截許多不同類型的分子相互作用。不過，它的缺點在于能與Protein A和IgG抗體相互作用。解決這個問題的一種方法是使用雞或魚的正常血清。

四、抗體濃度須優(yōu)化

　　如果試劑稍有不同，則可能需要優(yōu)化抗體的量。非特異的抗體結(jié)合會增加背景。為了防止這一點，切勿使用過多的一抗或二抗。

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