酶組織化學顯示的常見三種方法介紹

 酶作為一種催化劑，已被廣泛地應用于輕工業(yè)的各個生產領域。近幾十年來，隨著酶工程的迅猛發(fā)展，酶在生物工程、生物傳感器、環(huán)保、醫(yī)藥等方面的應用也日益擴大，可以說酶已成為國民經濟中*的一部分，現實生活中，人們的衣、食、住、行及其他方面的新技術幾乎都離不開酶。
而酶類的顯示方法常見的也有好多種，現在就有上海滬鼎生物以常見的三種一一為你列舉分析吧！

   *種．偶聯偶氮色素法  此法又稱偶氮色素法（couplingazo dyemethod），是指用某種人工合成底物在酶作用下產生分解產物，分解產物與重氮鹽結合，引起偶聯偶氮反應，形成不溶性偶氮色素，以此對酶定位。常用的底物是萘酚系列化合物，如l—萘酚、2—萘酚、6—溴—2—萘酚、萘酚AS、萘酚AS衍生物等。由于重氮鹽的種類不同，偶氮色素的顏色也不同，可顯示出紫色、藍色、紅色、褐色、棕色和黑色等各種顏色。
    重氮鹽有不同程度的抑制酶活性作用，因此必須選擇抑制作用zui弱的種類使用。根據重氮鹽抑制作用的有無和強弱，可將偶氮色素法分為兩種：
    （1）同時偶聯法：是在底物混合液中，通過酶分解作用所得到的沉著物立即與重氮鹽偶聯形成偶氮色素。
    （2）后偶聯法：為防止重氮鹽對酶的抑制作用，先使酶與底物發(fā)生作用，使分解產物沉著，然后再浸漬于重氮鹽液中，使其形成偶氮色素。
    偶聯偶氮色素法具有作用時間較短、不容易發(fā)生酶丟失、正常組織細胞中無內源性底物和zui終反應產物不易褪色等優(yōu)點。但該法所用底物的分解產物有不同程度擴散，故定位欠準確，且人工合成底物價格較貴。
第二種．金屬—金屬鹽法  一般是指金、銀、銅、鐵、鉛和鈷等金屬，金屬本身或其鹽的化合物都具有顏色，容易發(fā)生呈色反應。而且酶的分解產物容易與金屬結合。因此，捕捉酶反應的分解產物，使其與金屬結合，利用呈色反應，再現酶反應部位，可以證明某種酶的存在。故稱為金屬—金屬鹽法或金屬沉著法（metal precipitation method），此法大致分三種：
    （1）酶作用于底物時，其分解產物與底物混合液中某種物質結合，·沉著在作用部位，然后結合物被金屬置換，通過金屬顯色來證明酶的存在。把上述反應過程歸納為三個階段，即酶反應階段、金屬置換階段和顯色階段。
    （2）與*種方法相比，省略了金屬置換步驟。酶作用于底物后的分解產物與底物孵育液中的金屬離子相結合，直接沉著于酶反應部位，使其顯色。
  （3）此法特點是使用人工底物（前兩種方法使用天然底物）。在酶的作用下，人工底物的分解產物與特定金屬結合，立即顯色，或通過顯色操作使其顯色。此法包括硫代膽堿銅法和羥喹啉鐵法。其優(yōu)點是：底物、捕捉劑價格便宜；金屬離子容易反應，沉著顆粒微細，反應色調鮮明。缺點是易褪色，組織細胞中有些成分可吸附金屬離子，產生假陽性反應。
    第三種．色素形成法  在酶作用下使無色化學物質在局部形成色素沉著。以下主要介紹三種類型：
    （1）四唑鹽法（tetrazolium method）：此法主要顯示各種脫氫酶。在脫氫酶作用下，組織切片在含有四唑鹽或雙四唑鹽的底物混合液中，使底物分離出的氫原子與五色四唑鹽或雙四唑鹽結合形成紅色或藍色甲臘（formazane）或二甲臘（difomazane）色素。這種色素沉著于酶所在部位。

四唑鹽法原理
    （2）靛酚藍法（indophenol blue method）：該法主要顯示細胞色素氧化酶和過氧化物酶，是Na—di反應用于檢測氧化酶的方法。把二甲基—對—苯二胺和a—萘酚加入底物混合液中，由酶作用而釋放的氧與此兩者結合，形成靛酚藍而顯示酶的部位。也可以用4—氨基—N、N—二甲基萘胺（AND）代替二甲基—對—苯二胺。

靛酚鹽法原理
    （3）靛藍形成法（indigo formatlon method）：又稱靛藍法或吲哚酚法，在酶作用下，分解底物酯型吲哚酚化合物，產生出吲哚酚，在氧存在的情況下形成藍色靛藍，使酶存在部位顯色。

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