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軟瓊脂實驗步驟新篇章

日期:2013-03-21瀏覽:3430次

軟瓊脂(soft agar)實驗一般用來檢測細胞的集落形成能力?,F(xiàn)在這種方法越來越多的用于分離癌細胞,也可以用來確認癌細胞是否具有癌化特性,為進一步做腫瘤小鼠移植模型奠定理論基礎。該方法看似簡單,但如果細節(jié)掌握不好,往往導致實驗失敗或數(shù)據(jù)缺乏說服力。如果你曾經(jīng)在這個實驗上栽了跟頭,請不妨在如下幾個方面進行嘗試:
 
1.要確保在整個實驗過程中所使用的瓊脂處于*液體狀態(tài)(>80℃),尤其是在做基底時,如果瓊脂凝固過快會導致基底不均一;
2. 做瓊脂基底是應避免產(chǎn)生小氣泡,一旦有小氣泡產(chǎn)生,應該立即將氣泡趕走;
3. 應使用2倍濃度的培養(yǎng)基,并加入20%FBS 和2%的P/S;
4. 在制備上層時,混合液體需要有順序,一般為在同一個移液管中先吸取液態(tài)瓊脂,再吸取同體積的2倍濃度的培養(yǎng)基,zui后在吸取2倍體積的細胞懸液,這樣既可以保證瓊脂不立即固化,又可以有效避免細胞因溫度過高而燙死;
5. 因為該實驗周期較長,為避免過度蒸發(fā)而導致瓊脂裂解,需要保證小環(huán)境持久濕潤,一般可在六孔板或培養(yǎng)皿下面墊上三到四層濕潤的薄紙。

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