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細(xì)胞活化與復(fù)蘇

日期:2021-05-18瀏覽:812次

  很多小伙伴做實驗會用到細(xì)胞,那么我們在收到細(xì)胞時該如何處理呢?
  首先收到細(xì)胞株包裹時,請檢查細(xì)胞株冷凍管是否有解凍情形,若有請立即通知。細(xì)胞株請盡快開始培養(yǎng),或立即冷凍保存。

  細(xì)胞復(fù)蘇的原則-快速融化:
必須將凍存在-196℃液氮中的細(xì)胞快速融化至37℃,使細(xì)胞外凍存時的冰晶迅速融化,避免冰晶緩慢融化時進入細(xì)胞形成再結(jié)晶,對細(xì)胞造成損害。

 

一. 實驗前準(zhǔn)備:

1.將水浴鍋預(yù)熱至37℃

2.用75%酒精擦拭紫外線照射30min的超凈工作臺臺面。

3.在超凈工作臺中按次序擺放好消過毒的離心管、吸管、培養(yǎng)瓶等等。

  二.取出凍存管:

1.根據(jù)細(xì)胞凍存記錄按標(biāo)簽找到所需細(xì)胞的編號。

2.從液氮罐中取出細(xì)胞盒,取出所需的細(xì)胞,同時核對管外的編號。

  三.迅速解凍:

1.迅速將凍存管投入到已經(jīng)預(yù)熱的水浴鍋中迅速解凍,并要不斷的搖動,使管中的液體迅速融化。

2.約1-2min后凍存管內(nèi)液體*溶解,取出用酒精棉球擦拭凍存管的外壁,再拿入超凈臺內(nèi)。

  四.平衡離心:

用架盤天平平衡后,放入離心機中3000r/min 離心3min

五.制備細(xì)胞懸液:

1.吸棄上清液。

2.向離心管內(nèi)加入10ml培養(yǎng)液,吹打制成細(xì)胞懸液。

六.細(xì)胞計數(shù):

細(xì)胞濃度以5×105/ml為宜。

七、冷凍細(xì)胞解凍程序

1.依據(jù)細(xì)胞株數(shù)據(jù)單認(rèn)定之基礎(chǔ)培養(yǎng)基種類、血清種類和其它認(rèn)定之成份和比例,制備培養(yǎng)基。絕大多數(shù)之細(xì)胞均無法立即適應(yīng)不同之基礎(chǔ)培養(yǎng)基或不同之血清種類,若因?qū)嶒炐枰?,必須有所不同時, 務(wù)必以緩慢比例漸次改變培養(yǎng)基組成,確定細(xì)胞適應(yīng)后,方進行所需之實驗。

2.FBS(fetal bovine serum,胚牛血清),CS(calf serum, 小牛血清)和HS(horse serum,馬血清),對細(xì)胞而言差異極大,請務(wù)必依據(jù)細(xì)胞株資料單認(rèn)定之血清種類培養(yǎng)之。

3.將培養(yǎng)基置于37°C水槽中回溫,回溫后噴以70% 酒精并擦拭之,移入無菌操作臺內(nèi)。取出冷凍管,立即放入37°C 水槽中快速解凍,水面高度不可接近或高過冷凍管之蓋沿,否則易發(fā)生污染。輕搖冷凍管使其在1分鐘內(nèi)全部融化后,以70% ethanol擦拭冷凍管外部,移入無菌操作臺內(nèi)。

4.依據(jù)細(xì)胞種類和濃度,于無菌操作臺內(nèi)取10ml培養(yǎng)基加至T25或T75 flask中。取出已解凍之細(xì)胞懸浮液,緩緩加入T25或T75 flask內(nèi)之培養(yǎng)基,混合均勻,放入37°C,5% CO2培養(yǎng)箱培養(yǎng)。

5.對絕大多數(shù)細(xì)胞而言,1%以下之冷凍保護劑DMSO,不會對細(xì)胞之貼附或活化有不良影響,不需立刻由解凍細(xì)胞中去除,待第二天確定細(xì)胞生長或貼附良好后再去除即可。唯對極少數(shù)因?qū)MSO敏感或會造成細(xì)胞分化之細(xì)胞,需立即去除DMSO者。

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